Kit TIANcombi DNA Lyse & Det PCR

Purificação rápida de DNA de vários materiais para detecção por PCR.

O kit TIANcombi DNA Lyse & Det PCR adota um design de embalagem exclusivo que inclui todos os reagentes para preparação rápida de DNA genômico e amplificação por PCR. É aplicável para a purificação de DNA do genoma em uma etapa de várias amostras (tecidos de plantas, sementes, tecidos de animais, sangue, leveduras e bactérias) e a subsequente amplificação e detecção por PCR. A remoção de proteínas, RNA e outros metabólitos secundários, extração de solvente orgânico, bem como as etapas de precipitação do etanol não são necessárias em todo o processo de purificação, tornando a operação simples e rápida. A qualidade do produto é estável e confiável.

O 2 × Det PCR MasterMix fornecido por este kit é um reagente de PCR altamente compatível que pode amplificar DNA de maneira eficiente e específica sem a necessidade de remover impurezas, como proteínas. Este reagente contém Taq DNA polimerase, dNTPs, MgCl2, tampão, bem como o intensificador, otimizador e estabilizador para a reação de PCR. A aplicação do reagente torna a reação de PCR rápida, simples, sensível, específica e estável. Portanto, este kit é especialmente adequado para triagem de alto rendimento.

Gato. Não Tamanho da embalagem
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Detalhes do produto

Exemplo Experimental

Perguntas frequentes

Tags de produto

Recursos

■ Simples e rápido: o DNA de diferentes tecidos pode ser extraído em 5 minutos sem a necessidade de moagem de nitrogênio líquido.
■ Amplas aplicações: aplicável para folhas de plantas, sementes, tecidos animais, amostras de sangue (sangue fresco, anticoagulação, coágulos de sangue, manchas de sangue secas, etc.), fermento e bactérias.
■ Forte compatibilidade: o reagente de PCR é adequado para amplificação de DNA extraído de várias fontes de amostra.

Formulários

■ Detecção de genes: a escolha ideal para detecção de genes em grande escala.

Anotações importantes

■ Para amostras contendo alto nível de fenóis, como folhas de algodão, a quantidade de amostra de entrada deve ser estritamente inferior a 0,4 mg, caso contrário, a reação de PCR será afetada.

Todos os produtos podem ser personalizados para ODM / OEM. Para detalhes,clique em Serviço personalizado (ODM / OEM)


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    Experimental Exampl O DNA foi extraído de 5 mg de folhas e sementes de milho, trigo, arroz, soja e algodão, respectivamente. O DNA foi amplificado por PCR usando primers específicos. 6 μl de DNA do total de 20 μl de eluentes foram carregados por pista.
    1: Genoma de controle positivo; 2: deixe amostras; 3: amostras de sementes; 4: NTC; 5: primers D2000
    Experimental Example M: Marcador TIANGEN D2000; 1: controle positivo;
    2-7: O número de manchas de sangue seco no papel de filtro é 1-6 respectivamente; 8: Controle negativo.
    O perfurador de 3 mm foi usado para retirar as manchas de sangue secas do papel de filtro como material para o teste de extração.
    6 μl de DNA do total de 20 μl de eluentes foram carregados por pista.
    Experimental Exampl M: Marcador TIANGEN D2000; 1: Controle positivo (DNA genômico foi usado como molde); 2-7: A quantidade de sangue adicionada é de 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl e 60 μl, respectivamente; 8-13: A quantidade de sangue adicionada é de 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl e 60 μl, respectivamente; 14: NTC.
    6 μl de DNA do total de 20 μl de eluentes foram carregados no gel de agarose.
    Q: Sem bandas de amplificação

    Modelo A-1

    ■ O modelo contém impurezas de proteínas ou inibidores Taq, etc. —— Purifique o modelo de DNA, remova as impurezas de proteínas ou extraia o DNA do modelo com kits de purificação.

    ■ A desnaturação do modelo não está completa —— Aumente apropriadamente a temperatura de desnaturação e prolongue o tempo de desnaturação.

    ■ Degradação do modelo ——Reprepare o modelo.

    A-2 Primer

    ■ Baixa qualidade dos primers —— Sintetize novamente o primer.

    ■ Degradação do primer —— Aliquote os primers de alta concentração em um pequeno volume para preservação. Evite congelamento e descongelamento múltiplo ou criopreservação de 4 ° C por longo prazo.

    ■ Projeto inadequado de primers (por exemplo, o comprimento do primer não é suficiente, dímero formado entre os primers, etc.) -Redesign primers (evita a formação de primer dímero e estrutura secundária)

    A-3 Mg2+concentração

    ■ Mg2+ a concentração está muito baixa —— Aumente o Mg de maneira adequada2+ concentração: Otimize o Mg2+ concentração por uma série de reações de 1 mM a 3 mM com um intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg ideal2+ concentração para cada molde e primer.

    Temperatura de recozimento A-4

    ■ A alta temperatura de recozimento afeta a ligação do primer e do template. ——Reduza a temperatura de recozimento e otimize a condição com um gradiente de 2 ° C.

    Tempo de extensão A-5

    ■ Tempo de extensão curto —— Aumente o tempo de extensão.

    Q: falso positivo

    Fenômenos: Amostras negativas também mostram as bandas da sequência alvo.

    Contaminação A-1 de PCR

    ■ Contaminação cruzada da sequência-alvo ou produtos de amplificação ——Cuidado para não pipetar a amostra que contém a sequência-alvo na amostra negativa ou derramar para fora do tubo de centrífuga. Os reagentes ou equipamentos devem ser autoclavados para eliminar os ácidos nucléicos existentes, e a existência de contaminação deve ser determinada por meio de experimentos de controle negativo.

    ■ Contaminação do reagente —— Aliquote os reagentes e armazene-os em temperatura baixa.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ a concentração está muito baixa —— Aumente o Mg de maneira adequada2+ concentração: Otimize o Mg2+ concentração por uma série de reações de 1 mM a 3 mM com um intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg ideal2+ concentração para cada molde e primer.

    ■ Projeto de primer impróprio e a sequência alvo tem homologia com a sequência não alvo. —— Refaça os primers.

    Q: amplificação não específica

    Fenômenos: As bandas de amplificação de PCR são inconsistentes com o tamanho esperado, seja grande ou pequeno, ou às vezes ocorrem bandas de amplificação específicas e bandas de amplificação não específicas.

    A-1 Primer

    ■ Baixa especificidade do primer

    —— Primer de redesenho.

    ■ A concentração do primer está muito alta —— Aumente adequadamente a temperatura de desnaturação e prolongue o tempo de desnaturação.

    A-2 Mg2+ concentração

    ■ O Mg2+ a concentração é muito alta —— Reduza adequadamente a concentração de Mg2 +: Otimize o Mg2+ concentração por uma série de reações de 1 mM a 3 mM com um intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg ideal2+ concentração para cada molde e primer.

    Polimerase A-3 Termostável

    ■ Quantidade excessiva de enzima - reduza a quantidade de enzima de forma adequada em intervalos de 0,5 U.

    Temperatura de recozimento A-4

    ■ A temperatura de recozimento está muito baixa —— Aumente apropriadamente a temperatura de recozimento ou adote o método de recozimento de dois estágios

    Ciclos de PCR A-5

    ■ Muitos ciclos de PCR —— Reduza o número de ciclos de PCR.

    Q: Bandas irregulares ou manchadas

    A-1 Primer—— Especificidade pobre —— Desenhe novamente o primer, mude a posição e o comprimento do primer para aumentar sua especificidade; ou realizar PCR aninhado.

    DNA de modelo A-2

    ——O modelo não é puro —— Purifique o modelo ou extraia o DNA com kits de purificação.

    A-3 Mg2+ concentração

    ——Mg2+ a concentração é muito alta —— Reduza o Mg de maneira adequada2+ concentração: Otimize o Mg2+ concentração por uma série de reações de 1 mM a 3 mM com um intervalo de 0,5 mM para determinar o Mg ideal2+ concentração para cada molde e primer.

    A-4 dNTP

    —— A concentração de dNTPs está muito alta —— Reduza a concentração de dNTP de forma adequada

    Temperatura de recozimento A-5

    —— Temperatura de recozimento muito baixa —— Aumente apropriadamente a temperatura de recozimento

    Ciclos A-6

    —— Muitos ciclos —— Otimize o número do ciclo

    P: Quanto DNA modelo deve ser adicionado em um sistema de reação de PCR de 50 μl?
    ytry
    P: Como amplificar fragmentos longos?

    O primeiro passo é escolher a polimerase apropriada. A polimerase Taq regular não pode ser revisada devido à falta de atividade da exonuclease 3'-5 'e a incompatibilidade reduzirá muito a eficiência de extensão dos fragmentos. Portanto, a polimerase Taq regular não pode amplificar com eficácia fragmentos alvo maiores que 5 kb. A polimerase Taq com modificação especial ou outra polimerase de alta fidelidade deve ser selecionada para melhorar a eficiência da extensão e atender às necessidades de amplificação de fragmentos longos. Além disso, a amplificação de fragmentos longos também requer o ajuste correspondente do desenho do primer, tempo de desnaturação, tempo de extensão, pH do tampão, etc. Normalmente, os primers com 18-24 bp podem levar a um melhor rendimento. A fim de evitar danos ao molde, o tempo de desnaturação a 94 ° C deve ser reduzido para 30 segundos ou menos por ciclo, e o tempo para aumentar a temperatura para 94 ° C antes da amplificação deve ser inferior a 1 minuto. Além disso, definir a temperatura de extensão em cerca de 68 ° C e projetar o tempo de extensão de acordo com a taxa de 1 kb / min pode garantir a amplificação eficaz de fragmentos longos.

    P: Como melhorar a fidelidade da amplificação do PCR?

    A taxa de erro de amplificação por PCR pode ser reduzida usando várias DNA polimerases com alta fidelidade. Entre todas as Taq DNA polimerases encontradas até agora, a enzima Pfu tem a menor taxa de erro e a maior fidelidade (ver tabela anexa). Além da seleção da enzima, os pesquisadores podem reduzir ainda mais a taxa de mutação da PCR otimizando as condições de reação, incluindo a otimização da composição do tampão, a concentração da polimerase termoestável e a otimização do número do ciclo da PCR.

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