Kit RNAprep Pure Cell / Bacteria
Recursos
■ Tampões e protocolos otimizados para células em cultura e amostras de bactérias tornam o processo simples e conveniente.
■ A DNase I exclusiva minimiza a contaminação do DNA genômico.
■ As colunas de filtração sem RNase exclusivas CS eliminam outras contaminações.
■ O RNA de alta pureza e pronto para uso é adequado para aplicações sensíveis a jusante.
■ Sem extração de fenol / clorofórmio, sem precipitação de LiCl e etanol, sem centrifugação em gradiente de CsCl são necessários, o que torna o processo seguro e confiável.
Formulários
■ RT-PCR.
■ Northern Blot, Dot Blot.
■ PCR em tempo real.
■ Análise de chip.
■ PolyA Screening, tradução in vitro, análise de proteção RNase e clonagem molecular.
Todos os produtos podem ser personalizados para ODM / OEM. Para detalhes,clique em Serviço personalizado (ODM / OEM)
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Material: Células Jurkat Humanas (1 × 106 ) Método: O RNA total de células Jukat humanas foi isolado usando o kit RNAprep Pure Cell / Bacteria. Resultados: Por favor, veja a imagem acima da eletroforese em gel de agarose. 2-4 μl de 50 μl de eluatos foram carregados por pista. A eletroforese foi conduzida a 6 V / cm por 30 min em gel de agarose a 1%. |
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Material: TOP10 E.coli (1 × 108) Método: O RNA total de TOP10 E.coli foi isolado usando o kit RNAprep Pure Cell / Bacteria. Resultados: Por favor, veja a imagem acima da eletroforese em gel de agarose. 2-4 μl de 50 μl de eluatos foram carregados por pista. A eletroforese foi conduzida a 6 V / cm por 30 min em gel de agarose a 1%. |
A lise ou homogeneização celular A-1 não é suficiente
---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra usada ou aumente a quantidade de tampão de lise.
A-1 Lise celular insuficiente ou homogeneização
---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Consulte a capacidade máxima de processamento.
O RNA A-3 não é eluído completamente da coluna
---- Depois de adicionar água sem RNase, deixe agir por alguns minutos antes de centrifugar.
Etanol A-4 no eluente
---- Após o enxágue, centrifugue novamente e remova o tampão de lavagem tanto quanto possível.
O meio de cultura de células A-5 não foi completamente removido
---- Ao coletar células, certifique-se de remover o meio de cultura tanto quanto possível.
A-6 As células armazenadas no RNAstore não são centrifugadas de forma eficaz
---- A densidade de RNAstore é maior do que a média do meio de cultura de células; portanto, a força centrífuga deve ser aumentada. Sugere-se centrifugar a 3000x g.
A-7 Baixo conteúdo de RNA e abundância na amostra
---- Use uma amostra positiva para determinar se o baixo rendimento é causado pela amostra.
A-1 O material não é novo
---- Os tecidos frescos devem ser armazenados em nitrogênio líquido imediatamente ou colocados imediatamente no reagente RNAstore para garantir o efeito de extração.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra.
Contaminação de A-3 RNasen
---- Embora o tampão fornecido no kit não contenha RNase, é fácil contaminar RNase durante o processo de extração e deve ser manuseado com cuidado.
Poluição por eletroforese A-4
---- Substitua o tampão de eletroforese e certifique-se de que os consumíveis e o tampão de carregamento estejam livres de contaminação por RNase.
A-5 Carregamento demais para eletroforese
---- Reduza a quantidade de carregamento de amostra, o carregamento de cada poço não deve exceder 2 μg.
A quantidade de amostra A-1 é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra.
A-2 Algumas amostras têm alto conteúdo de DNA e podem ser tratadas com DNase.
---- Realize o tratamento com RNase-Free DNase para a solução de RNA obtida, e o RNA pode ser usado diretamente para experimentos subsequentes após o tratamento, ou pode ser posteriormente purificado por kits de purificação de RNA.
Para vidrarias, cozido a 150 ° C por 4 h. Para recipientes de plástico, imerso em NaOH 0,5 M por 10 min, em seguida, enxágue completamente com água sem RNase e, em seguida, esterilize para remover completamente a RNase. Os reagentes ou soluções utilizados no experimento, principalmente água, devem estar isentos de RNase. Use água sem RNase para todas as preparações de reagentes (adicione água a um frasco de vidro limpo, adicione DEPC a uma concentração final de 0,1% (V / V), agite durante a noite e autoclave).
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