TRNzol Universal Reagent
Recursos
■ Alta flexibilidade: Faixa selvagem de volume de amostra inicial, adequada para extração de amostra de grande volume em uma única reação.
■ Alto rendimento: o método de precipitação maximiza o rendimento de RNA na amostra.
■ Amplo uso: adequado para muitas amostras diferentes, como tecido vegetal e animal, células em cultura, sangue, fluidos corporais, etc.
■ Operação rápida: o DNA genômico pode ser obtido dentro de 1 hora.
Especificação
Modelo: Com base na precipitação
Amostra: Vírus, bactérias, fungos, animais, tecidos vegetais, células em cultura e fluidos corporais.
Alvo: RNA
Tempo de operação: ~ 1 hora
Formulários: O reagente TRNzol Universal minimiza a contaminação de impurezas, como DNA e proteínas no RNA total purificado, e pode ser usado diretamente para vários experimentos de biologia molecular, como Northern Blot, Dot Blot, triagem PolyA, tradução in vitro, análise de proteção de RNase, construção de biblioteca de cDNA , RT-PCR, PCR em tempo real e sequenciamento de alto rendimento.
Todos os produtos podem ser personalizados para ODM / OEM. Para detalhes,clique em Serviço personalizado (ODM / OEM)
Método: 30 mg de tecido de fígado de rato, 100 mg de folhas de arroz foram coletados por moagem de nitrogênio líquido; 1 × 106Células cultivadas com HepG2 e 700 μl de meio de cultura Saccharomyces Cerevisiae (OD600 = 0,9) foram coletados por centrifugação. 1 ml de TRNzol Universal Reagent da TIANGEN e os produtos relevantes dos fornecedores L e T foram adicionados a cada alíquota da amostra e a extração de RNA foi realizada seguindo os protocolos fornecidos por cada fornecedor. O volume de eluição foi de 80 μl, 50 μl, 30 μl e 30 μl para as quatro amostras, respectivamente. 3 μl do eluato foram carregados por pista.
MIII: Marcador III de TIANGEN;
A eletroforese foi conduzida a 6 V / cm por 30 min em agarose a 1%.
Resultados: TIANGEN TRNzol Universal Reagent pode extrair RNA de alta pureza e boa integridade de fígado de rato, folhas de arroz, células em cultura e amostras de levedura, com alta eficiência. A qualidade do RNA é comparável ou ligeiramente superior à dos produtos L e T do fornecedor.
A lise ou homogeneização celular A-1 não é suficiente
---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra usada ou aumente a quantidade de tampão de lise.
A-1 Lise celular insuficiente ou homogeneização
---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Consulte a capacidade máxima de processamento.
O RNA A-3 não é eluído completamente da coluna
---- Depois de adicionar água sem RNase, deixe agir por alguns minutos antes de centrifugar.
Etanol A-4 no eluente
---- Após o enxágue, centrifugue novamente e remova o tampão de lavagem tanto quanto possível.
O meio de cultura de células A-5 não foi completamente removido
---- Ao coletar células, certifique-se de remover o meio de cultura tanto quanto possível.
A-6 As células armazenadas no RNAstore não são centrifugadas de forma eficaz
---- A densidade de RNAstore é maior do que a média do meio de cultura de células; portanto, a força centrífuga deve ser aumentada. Sugere-se centrifugar a 3000x g.
A-7 Baixo conteúdo de RNA e abundância na amostra
---- Use uma amostra positiva para determinar se o baixo rendimento é causado pela amostra.
A-1 O material não é novo
---- Os tecidos frescos devem ser armazenados em nitrogênio líquido imediatamente ou colocados imediatamente no reagente RNAstore para garantir o efeito de extração.
A-2 Quantidade de amostra é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra.
Contaminação de A-3 RNasen
---- Embora o tampão fornecido no kit não contenha RNase, é fácil contaminar RNase durante o processo de extração e deve ser manuseado com cuidado.
Poluição por eletroforese A-4
---- Substitua o tampão de eletroforese e certifique-se de que os consumíveis e o tampão de carregamento estejam livres de contaminação por RNase.
A-5 Carregamento demais para eletroforese
---- Reduza a quantidade de carregamento de amostra, o carregamento de cada poço não deve exceder 2 μg.
A quantidade de amostra A-1 é muito grande
---- Reduza a quantidade de amostra.
A-2 Algumas amostras têm alto conteúdo de DNA e podem ser tratadas com DNase.
---- Realize o tratamento com RNase-Free DNase para a solução de RNA obtida, e o RNA pode ser usado diretamente para experimentos subsequentes após o tratamento, ou pode ser posteriormente purificado por kits de purificação de RNA.
Para vidrarias, cozido a 150 ° C por 4 h. Para recipientes de plástico, imerso em NaOH 0,5 M por 10 min, em seguida, enxágue completamente com água sem RNase e, em seguida, esterilize para remover completamente a RNase. Os reagentes ou soluções utilizados no experimento, principalmente água, devem estar isentos de RNase. Use água sem RNase para todas as preparações de reagentes (adicione água a um frasco de vidro limpo, adicione DEPC a uma concentração final de 0,1% (V / V), agite durante a noite e autoclave).
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