Kit RNAprep Pure FFPE

A lise ou homogeneização celular A-1 não é suficiente

---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.

A-2 Quantidade de amostra é muito grande

---- Reduza a quantidade de amostra usada ou aumente a quantidade de tampão de lise.

A-1 Lise celular insuficiente ou homogeneização

---- Reduza o uso de amostra, aumente a quantidade de tampão de lise, aumente a homogeneização e o tempo de lise.

A-2 Quantidade de amostra é muito grande

---- Consulte a capacidade máxima de processamento.

O RNA A-3 não é eluído completamente da coluna

---- Depois de adicionar água sem RNase, deixe agir por alguns minutos antes de centrifugar.

Etanol A-4 no eluente

---- Após o enxágue, centrifugue novamente e remova o tampão de lavagem tanto quanto possível.

O meio de cultura de células A-5 não foi completamente removido

---- Ao coletar células, certifique-se de remover o meio de cultura tanto quanto possível.

A-6 As células armazenadas no RNAstore não são centrifugadas de forma eficaz

---- A densidade de RNAstore é maior do que a média do meio de cultura de células; portanto, a força centrífuga deve ser aumentada. Sugere-se centrifugar a 3000x g.

A-7 Baixo conteúdo de RNA e abundância na amostra

---- Use uma amostra positiva para determinar se o baixo rendimento é causado pela amostra.

A-1 O material não é novo

---- Os tecidos frescos devem ser armazenados em nitrogênio líquido imediatamente ou colocados imediatamente no reagente RNAstore para garantir o efeito de extração.

A-2 Quantidade de amostra é muito grande

---- Reduza a quantidade de amostra.

Contaminação de A-3 RNasen

---- Embora o tampão fornecido no kit não contenha RNase, é fácil contaminar RNase durante o processo de extração e deve ser manuseado com cuidado.

Poluição por eletroforese A-4

---- Substitua o tampão de eletroforese e certifique-se de que os consumíveis e o tampão de carregamento estejam livres de contaminação por RNase.

A-5 Carregamento demais para eletroforese

---- Reduza a quantidade de carregamento de amostra, o carregamento de cada poço não deve exceder 2 μg.

A quantidade de amostra A-1 é muito grande

---- Reduza a quantidade de amostra.

A-2 Algumas amostras têm alto conteúdo de DNA e podem ser tratadas com DNase.

---- Realize o tratamento com RNase-Free DNase para a solução de RNA obtida, e o RNA pode ser usado diretamente para experimentos subsequentes após o tratamento, ou pode ser posteriormente purificado por kits de purificação de RNA.

Para vidrarias, cozido a 150 ° C por 4 h. Para recipientes de plástico, imerso em NaOH 0,5 M por 10 min, em seguida, enxágue completamente com água sem RNase e, em seguida, esterilize para remover completamente a RNase. Os reagentes ou soluções utilizados no experimento, principalmente água, devem estar isentos de RNase. Use água sem RNase para todas as preparações de reagentes (adicione água a um frasco de vidro limpo, adicione DEPC a uma concentração final de 0,1% (V / V), agite durante a noite e autoclave).